临床微生物实验室分枝杆菌操作指南中有关核酸扩增技术的建议！

1.核酸扩增技术能代替抗酸杆菌涂片吗？

尽管核酸扩增技术是检测结核杆菌的一种快速方法，但由于样本的质量、使用的具体核酸扩增技术方法、样本中细菌的载量以及取样偏差等因素，可能会出现假阴性结果。此外，大多数核酸扩增技术不能检测非结核分枝杆菌，而核酸扩增技术结果阴性而抗酸杆菌涂片阳性是非结核分枝杆菌存在的良好提示。在分枝杆菌检测方案中，为使核酸扩增技术不依赖于抗酸杆菌涂片的结果，核酸扩增技术和抗酸杆菌涂片可以同时进行。对于医务人员来说，与抗酸杆菌涂片结果相结合来解释核酸扩增技术的结果非常重要。

2. 当进行核酸扩增技术检测时，是否需要把抗酸杆菌涂片和培养包括在检测方案中？

应始终执行抗酸杆菌涂片和培养。抗酸杆菌涂片结果阳性给医务人员提供了有价值的信息。结核杆菌培养更为敏感，仍然是金标准。

3.何时对核酸扩增技术检测阳性标本进行耐多药结核病的筛查？

如果对原始标本或沉渣没有进行耐多药结核病筛查，理想的做法是，应对所有首次核酸扩增技术检测阳性的标本或结核分枝杆菌初次分离株进行耐多药结核筛查。如果实验室不能进行此项检测，应考虑将标本送交参考实验室或当地公共卫生实验室进行检测。

4.何时应对抗酸杆菌涂片阳性标本进行分枝杆菌的菌种鉴定？

所有抗酸杆菌涂片阳性的标本都应进行分枝杆菌的菌种鉴定，因为它们可能具有临床意义。一旦培养物抗酸杆菌涂片阳性，确定或者排除结核分枝杆菌复合体非常重要。理想的做法是，应该每天对阳性培养物进行菌种鉴定。如果一个实验室正在进行分离物培养，使用探针进行鉴定可能有价值，因为它们可以对最常见的分枝杆菌提供快速的检测结果。实验室如果没有菌种鉴定的方法，应将分离物转交给适当的参考实验室或公共卫生实验室进行检测。

5.对于非呼吸道标本，检测方案该如何改变？

对于非呼吸道标本，目前没有FDA批准或认可的核酸扩增技术检测方法。建议每个实验室规定这些样本类型的检测要求以及与此类检测相关的性能特征。

6.如果不同的核酸扩增技术检测结果不一致时，应该怎么做？

采用不同的核酸扩增技术检测方法作为诊断方法可能产生不一致的检测结果，即一种方法产生阳性结果，而另一种方法产生阴性结果。随着核酸扩增技术和其他分子生物学方法的使用增加，这些检测方法将会产生不一致的检测结果。临床上解释这些不一致的结果是一个很大的挑战。导致不一致结果的原因包括标本质量、分子检测方法可能针对微生物基因组的不同部分以及取样偏倚等。而最重要的是，应知道没有任何一个测试检测是100%准确的，而且对同一分析物进行多次检测时，同样可能会出现不一致的结果。医务人员在解释不一致结果时可向结核病专家寻求帮助。在美国，除了这些结核病专家外，医务人员还可联系TuberculosisCenters of Excellence（由CDC资助）。

参考文献： Clin Microbiol Rev, 2018, 31:e00038-17. https://doi.org/10.1128/CMR.00038-17

作者：陈舒影 余方友    来源：上海肺科检验